Matrix標(biāo)準(zhǔn)型含酚紅基質(zhì)膠

　　基底膜是動物體內(nèi)上皮細(xì)胞基底面的一層基質(zhì)膜。LYNJUNE®Matrix是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分，所形成的基質(zhì)膠。該基質(zhì)膠主要成分為laminin，collagen IV，heparan sulfate proteoglycans(Kleinman et al. 1986)。同時，該基質(zhì)膠也包含多種生長因子，例如表皮生長因子EFG，血小板衍生生長因子PDGF，神經(jīng)生長因子NGF，堿性成纖維細(xì)胞生長因子FGF-2，乙型轉(zhuǎn)化生長因子TGF-beta和胰島素樣生長因子ILGF(Vukicevic et al. 1992)。

　　產(chǎn)品來源：

　　Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分

　　產(chǎn)品儲存：

　　建議您融化后先按照單次用量進行分裝，保存-20°C冰箱，有效期2年。

　　產(chǎn)品性質(zhì)：

　　本品在4°C條件下為液態(tài)，但在加熱到37°C時呈凝膠狀態(tài)。基質(zhì)膠凝固后，重新放回4°C過夜，基質(zhì)膠可再次液化。

　　注意事項：

　　該基質(zhì)膠在溫度高于10°C時就會開始凝固成膠，所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。類器官傳代時，如果為了避免酶對類器官造成影響，可直接用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對基質(zhì)膠進行緩慢吹打，即可將類器官從基質(zhì)膠中釋放出來。

　　產(chǎn)品應(yīng)用：

　　本品適用于類器官生長、分化、代謝和毒理學(xué)研究，體內(nèi)和體外血管生成實驗。

　　操作方法：

　　一、腫瘤類器官藥敏實驗(操作所需時間為2小時)

　　1.將擴增好足夠量的腫瘤類器官(實驗組)以及正常類器官(對照組)用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行重懸，緩慢機械吹打，促進膠液化溶解，并保持類器官結(jié)構(gòu)完整(可用于懸浮培養(yǎng)于有5%基質(zhì)膠溶液的基質(zhì)膠表面)(Guillen et al. 2022)?；蛘咄ㄟ^TryplE酶消化獲得單細(xì)胞懸液。

　　2.離心收集類器官細(xì)胞，并進行細(xì)胞計數(shù)。

　　3.加入LYNJUNE®基質(zhì)膠原液，與細(xì)胞進行混勻。

　　4.將細(xì)胞與膠的混合物，通過排槍加入37°C預(yù)熱過的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養(yǎng)箱。

　　5.大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固，加入相應(yīng)體積的類器官培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。

　　6.類器官形成后(如果是機械吹打，類器官將在傳代24h后就會形成;如果是酶消化，類器官會在3-5天后形成)，每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。

　　7.用高內(nèi)涵顯微鏡上進行活細(xì)胞成像，測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。

　　二、血管生成實驗(以永生化HUVEC細(xì)胞系為例，操作所需時間為1小時)

　　1.將培養(yǎng)基換成饑餓細(xì)胞用培養(yǎng)基：加入含0.2% FBS，2mM L-gaxa，1mM丙酮酸鈉，100U/ml青ms和100µg/ml鏈ms的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時。

　　2.將LYNJUNE®基質(zhì)膠均勻鋪滿96孔板底。注意：槍頭需提前預(yù)冷半小時。盡量在冰上操作，避免基質(zhì)膠過早固化，避免氣泡產(chǎn)生。

　　3.將96孔板在細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育30min，固化基質(zhì)膠。

　　4.消化HUVEC細(xì)胞，并計數(shù)。

　　5.將200µL的HUVEC細(xì)胞懸液(含5X10^4個細(xì)胞)加于含基質(zhì)膠的96孔板中。將96孔板放于培養(yǎng)箱。

　　6.血管樣網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)將于3至12小時間形成。

　　7.在血管網(wǎng)絡(luò)形成時，小心去除培養(yǎng)基，并用加入含活細(xì)胞染料1/1000 Calcein AM(綠色)的培養(yǎng)基進行染色，并用顯微鏡進行拍照記錄。

　　三、神經(jīng)軸突3D生長實驗(以大鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞為例，操作所需時間為2小時)

　　1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科分離出大腦皮層于4°C預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基中。

　　2.用吸管輕緩吹打，然后用70µm濾網(wǎng)過來，獲得單細(xì)胞懸液，并進行細(xì)胞計數(shù)。

　　3.離心(300g，3min)，棄上清。將細(xì)胞與LYNJUNE®基質(zhì)膠進行混合，然后將基質(zhì)膠混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。

　　4.將24孔板放于培養(yǎng)箱，大約10min后，LYNJUNE®基質(zhì)膠將凝固。加入1mL神經(jīng)元分化培養(yǎng)基：Neurobasal medium，2% B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天開始，就能觀察到有明顯的神經(jīng)軸突生長。

　　5.在第7天可觀察到大量的神經(jīng)突(Neurite)長出。

　　僅 供 研 究 用 途 ，不 得 用 于 診 斷 或 治 療 程 序 。

　　Matrix標(biāo)準(zhǔn)型含酚紅基質(zhì)膠本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。