BUNSEN本生小課堂：白介素ELISA試劑盒結(jié)果異常分析

　　白細(xì)胞介素，簡(jiǎn)稱白介素，是指在白細(xì)胞或免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴因子，它和血細(xì)胞生長(zhǎng)因子同屬細(xì)胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細(xì)胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。

　　白介素ELISA檢測(cè)試劑盒兩大問題

　　問題一：造成白介素ELISA試劑盒結(jié)果異常的原因

　　A、試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響。

　　B、試劑盒、樣品用前未平衡至室溫。

　　C、加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。

　　D、必須在有效期內(nèi)使用，超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)。

　　E、孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整。

　　F、洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。

　　G、蒸餾水水質(zhì)有問題。

　　H、洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時(shí)間太長(zhǎng)。

　　I、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

　　問題二：白介素ELISA試劑盒顯色反響應(yīng)避光運(yùn)用

　　白介素ELISA試劑盒目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后常可呈現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構(gòu)成和試驗(yàn)的條件不一樣而異，因而試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無色，而陽性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。ELISA試劑盒定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。

　　OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，ELISA試劑盒再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

　　TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響調(diào)查成果。但為確保試驗(yàn)成果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)頂feng峰，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時(shí)后即可徹di衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)刻(12-24小時(shí))不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此刻可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。

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